(一)改良Gomori硝酸铅法(冷冻切片)
1.孵育液配制
(1)试剂p H5.0巴比妥醋酸缓冲液20ml,3%β-甘油磷酸钠2ml与硝酸铅24g。
(2)配制方法:用巴比妥醋酸缓冲液溶解硝酸铅,然后再加入3%β-甘油磷酸钠彻底混合,过滤,测定p H,并校至5.0。
2.操作方法
(1)冷冻切片,附贴于硅化载玻片,吹干30min后,纯丙酮固定5~10min。
(2)蒸馏水轻洗。
(3)将切片入孵育液37℃孵育箱孵育30~120min。
(4)蒸馏水冲洗1min。
(5)用1%冰醋酸水溶液浸洗30s。
(6)蒸馏水冲洗1min。
(7)用1%硫化铵水溶液处理1min。
(8)流水冲洗,蒸馏水洗。
(9)核固红细胞核染色5min。
(10)流水洗5~10min。
(11)常规脱水,透明,封固。
3.结果 细胞核:红色;酸性磷酸酶活性部位:棕黄至棕黑色。
(二)改良Gomori硝酸铅法(石蜡切片)
1.孵育液配制 同改良Gomori硝酸铅法的孵育液配制。
2.操作方法
(1)石蜡切片脱蜡至水。
(2)蒸馏水洗。
(3)将切片入孵育液37℃孵育箱孵育120min以上(时间视情况定)。
(4)蒸馏水洗1min。
(5)用1%冰醋酸水溶液浸洗30s。
(6)蒸馏水浸洗1min。
(7)用1%硫化铵水溶液处理1min。
(8)自来水洗,蒸馏水洗。
(9)用1%核固红细胞核染色5~10min。
(10)流水冲洗5~10min,蒸馏水洗。
(11)常规脱水,透明,封固。
3.结果 细胞核:红色;酸性磷酸酶活性部位:棕黄至棕黑色。
4.注意事项
(1)丙酮固定切片时,酶活性破坏较大,故孵育切片时间需延长,容易加深背景染色。
(2)孵育液可以连续用几次,但应注意液体挥发,如挥发多时可加适量的蒸馏水。
