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糖原染色(过碘酸-雪夫反应)

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糖原染色(过碘酸-雪夫反应)

    

    【原理】过碘酸-雪夫反应(periodic acid-Schiff reaction,PAS)又称糖原染色,其原理为细胞内含有乙二醇基的多糖类,被过碘酸氧化产生双醛基,此醛基与雪夫试剂(Schiff液)作用,使无色的品红变成紫红色染料,而沉积于含有多糖类的细胞内。

    【试剂】

    1.固定液 95%乙醇。

    2.过碘酸作用液 过碘酸1g溶于蒸馏水100ml中,置4℃保存(临用前配制为好)。

    3.雪夫试剂(Schiff液) 400ml蒸馏水煮沸除去CO2,逐渐加碱性品红2.0g,溶解后,冷却至60℃,加1mmol/L HCl 40ml,再加偏重亚硫酸钠(NaHSO3)4g,放置24h后加活性炭1.5g,放置0.5d后过滤,置棕色瓶中,于4℃保存。

    4.20g/L甲绿溶液或1%亚甲蓝。

    【操作】

    1.新鲜或陈旧血片、骨髓片用固定液固定10min,取出,待干。

    2.滴加过碘酸作用液,作用10min,水洗,待干。

    3.浸入Schiff液30min,水洗。

    4.用20g/L甲绿复染5~10min或1%亚甲蓝1~2min,水洗,待干,用油镜镜检。

    【注意事项】

    1.Schiff液变红即不能再用,以免出现假阳性反应。

    2.配制Schiff液器具须十分清洁干燥,试剂置于棕色瓶内4℃保存。

    3.已染色的标本不能久置,应1周内观察结果。

    4.固定液可用乙醇、甲醇或甲醛,但以95%乙醇固定后阳性结果最明显。

    5.浸入Schiff液前,染色的片子一定要待干,否则影响染色效果。

    【结果】

    1.结果判断 胞质内染成红色或紫红色,呈颗粒状、块状或弥漫状物质为阳性反应,阳性程度判断标准如下:

    0分(-):胞质无色,无颗粒状物质。

    1分(+):胞质淡红色或有少数红色阳性颗粒,阳性颗粒常少于10个。

    2分(++):胞质红色或有红色阳性颗粒,阳性颗粒多于10个。

    3分(+++):胞质暗红色或有粗大红色阳性颗粒,可呈红色块状。

    4分(++++):胞质紫红色或呈粗大红色块状。

    2.结果报告 报告阳性率与积分值,其计算方法同中性粒细胞碱性磷酸酶染色。

    【正常血细胞的染色反应】(图3-6)。

    1.粒细胞系统 原始粒细胞呈阴性或阳性反应(分化差的原始粒细胞呈阴性反应,分化好的原始粒细胞呈阳性反应),自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应,阳性反应的强度随细胞发育成熟而增强;嗜酸性粒细胞的颗粒不着色,胞质呈红色;嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性反应,胞质不着色。

    

图3-6 正常血细胞PAS染色
1.原始粒细胞和早幼粒细胞(+);2.中幼粒和晚幼粒细胞(++);3.中性杆状核和分叶核粒细胞(++++);
4.嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞(+++);5.单核细胞(+);6.淋巴细胞(+);7.中幼红和晚幼红细胞(-)

    2.红细胞系统 幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。

    3.单核细胞系统 分化差的原始单核细胞呈阴性反应,幼稚单核细胞和单核细胞可呈阳性反应,大多数阳性物质呈细颗粒状,有时细胞边缘的阳性颗粒较粗大。

    4.淋巴细胞系统 淋巴细胞大多呈阴性反应,但少数淋巴细可呈阳性反应(阳性率常<20%),阳性物质呈粗颗粒状或块状。

    5.巨核细胞系统 巨核细胞和血小板均呈阳性反应,阳性物质呈细颗粒状或块状(图3-7)。

    6.其他细胞 浆细胞常呈阴性反应,少数可呈阳性反应,阳性物质呈细颗粒状;巨噬细胞呈阳性反应,阳性物质也呈细颗粒状。

    【临床意义】

    1.用于鉴别红细胞系统疾病 红白血病和骨髓增生异常综合征时幼红细胞可呈阳性反应(图3-8),缺铁性贫血和珠蛋白生成障碍性贫血时幼红细胞也可呈阳性反应,而巨幼细胞贫血、再生障碍性贫血和溶血性贫血时幼红细胞呈阴性反应。

    

图3-7 AML-M7原始巨核细胞PAS染色阳性

    

图3-8 红白血病幼红细胞PAS染色阳性

    2.用于鉴别白细胞系统疾病 急性淋巴细胞白血病时原始和幼稚淋巴细胞呈阳性反应,阳性物质呈粗颗粒状或块状,而传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症时的淋巴细胞呈阴性或弱阳性。急性粒细胞白血病时原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应,阳性物质呈细颗粒状或淡红色弥漫状。急性单核细胞白血病时原始和幼稚单核细胞可呈阳性反应,阳性物质呈细颗粒状,有时细胞边缘的阳性颗粒较粗大。

    3.用于鉴别其他细胞 戈谢细胞呈强阳性反应,而尼曼-匹克细胞呈弱阳性或阴性反应;不典型的巨核细胞呈强阳性反应,而霍金奇细胞(R-S细胞)呈阴性或弱阳性反应;转移性腺癌细胞呈强阳性反应。

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