(二)UV/VIS-5100紫外-可见分光光度计的使用
UV5100是由上海元析仪器有限公司生产的紫外-可见分光光度计，因波长范围是:200～1000nm的连续光谱，所以能在紫外、可见、近红外光谱区区域对样品物质作定性和定量分析。
1．UV/VIS-5100型分光光度计的性能指标
波长范围:200～1000nm
光谱带宽:4nm
波长精度:≤±2nm
波长重复性:≤0．5nm
光度准确度:±0．5%T
光度重复性:0．3%T
稳定性:0．003A/h
杂散光:≤0．2%T
数据输出:USB
打印输出:并行口
显示系统:128×64位液晶显示器
光源:钨灯、氘灯
透射比范围:0．0～200%(T)
吸光度范围:－0．3～3(A)
浓度显示范围:0～9999(C)
外形尺寸:430mm×300mm×160mm
2．仪器的外部结构以及功能键的使用(见附图4和附表10)
附图4 UV-5100可见/紫外分光光度计的外部结构
附表10 UV-5100可见/紫外分光光度计的外部按键及功能
3．仪器的基本操作
(1)开启和自检
①仪器开启:用电源线连接上电源，打开仪器开关(位于仪器的后右侧)，仪器开机后进入系统自检过程。
②系统自检:在自检状态，仪器会自动对滤光片、灯源切换、检测器、氘灯、钨灯、波长校正、系统参数和暗电流进行检测。如果某一项自检出错，仪器会自动鸣叫报警，同时显示错误项，用户可按任意键跳过，继续自检下一项。
③系统预热:仪器开机后，因电器件需要预热一定的时间后方可达到稳定状态;另外氘灯周围环境也需要一定时间方能达到热平衡，所以仪器需要预热约20分钟后，方可正常使用。自检结果后，仪器进入预热状态，预热时间为20分钟，预热结束后仪器会自动检测暗电流一次。预热时可以按任意键跳过。
④进入系统主菜单:仪器自检结束后进入主界面。按“MODE”键可以在T、A、C、F间自由转换，分别实验透过率测试，吸光度测试，标准曲线和系统法等功能。
(2)透过率测试
在此功能下，可进行固定波长下的透过率测试，也可以将测量结果打印输出。
①设定工作波长:在系统主界面下，系统的默认功能项为透过率测试，此时直接按“GOTOλ”键可以进入波长设定界面，用上下键来改变波长值，每按一次该键则屏幕上的波长值会相应增加或减少0.1nm，按“ENTER”键确认。可以长按此二键，则数字会快速变化，直至所需的波长值为止，按“ENTER”键确认。波长设定完成后自动返回上级界面。
②按“ZERO”键对当前工作波长下的空白样品进行调100.0%T:在调100．0%T之前记得将空白样品拉(推)入光路中，否则调100．0%T的结果不是空白液的100．0%T，使得测量结果不正确。
③进行测量:当调100．0%T完成后，把待测样品拉(推)入光路中，按“ENTER”键进入测量界面(若已经在测量界面下，则无需此项操作，直接进行后面的操作即可)，按“ENTER”键即可在当前工作波长下对样品进行透过率的测量。每按下一次“ENTER”键，系统会自动将当时所显示的数值记录到数据存储区，但当查看时，液晶显示屏的每一屏只可显示5行数据，其余数据可通过按上下键进行翻页显示。
④数据打印与清除:数据存储区最多可存储200组数据。如果要打印或消除已测量数据，可在测量结果显示界面下，按“PRINT/ CLEAR”键，进入打印或删除界面，用上下键选择对应的操作即可。按“ESC”键即退出该界面。
(3)吸光度测试
①按“MODE”键切换至A模式(即吸光度测量模式)
②设定工作波长，设定方法同“透光率测试”。
③按“ZERO”键对当前工作波长下的空白样品进行调0．000A。
④进行测量。当调0．000A完成后，把待测样品拉(推)入光路中，按“ENTER”键进入测量界面，并按“ENTER”键将测量的数据存入数据存储区。
(4)标准曲线法
标准曲线法是用已知浓度的标准样品，建立标准曲线，然后用所建立的标准曲线来测量未知样品浓度的一种定量测试方法。
①进入标准曲线法主界面(C模式):按“MODE”键至光标切换到“C”上即可进入标准曲线模式。在此功能下，可以利用标准样品建立标准曲线，并可用所建标准曲线对未知样品浓度进行测试。
接下来的操作按照标准曲线是否为新建分为新建标准曲线和直接打开标准曲线两种方法(附图5)。
附图5 标准曲线法功能框架图
②新建标准曲线法的操作步骤:
A．新建曲线:在标准曲线法主界面下，用上下键选定“新建曲线”，按“ENTER”键进入建立标准曲线步骤，根据仪器界面的提示逐步操作。
B．进入标准样品个数设定界面。选定“新建曲线”后，按“ENTER”键，进入标准样品个数设定界面。根据需要，按下下键选择标准样品个数，并按“ENTER”键确认。标样数的设定范围为:1～12，在此界面下进行波长设定。
C．标准样品浓度设定:当样品个数输入完成后自动进入浓度设置界面。此时首先将参比样拉入光路，然后按“ZERO”键校空白。然后根据提示将1号标样拉入光路，并输入1号标准样品的浓度，输入方法如下:光标最初停留在第一位上闪烁，此时按上下键，则该位数字会在0～9和小数点间变化，选择所需的数字并按“ENTER”键确认，则光标会自动移到第二位上，用同样的方法输入第二位及以后的各位数字。当输入完最后一位数字时按“ENTER”键，则系统会自动记录其吸光度并转入2号标样输入界面。然后将2号标样拉入光路，并参照1号标样的输入方法输入2号标样的浓度。重复上述步骤。直至最后一个标样的浓度输入完成。
D．绘制标准曲线:当最后一个标样的浓度输入完成并按“ENTER”键确认后，系统会自动显示所建立的标准曲线与曲线方程和相差系数R。
注意事项:
A)浓度的设定范围为:0～9999．9，否则视为无效，需要重新输入，标准样品一般按照浓度由低向高依次放入光路中，即1号样品往往是配制的标准样品中浓度最低的。
B)仪器在曲线建立过程中，若系统认为采入的数据有误(有可能是操作错误，也有可能是溶液配制有问题)，则会蜂鸣3声后返回主界面，且标准曲线无法正常绘出。
E．进入浓度测试界面:在标准曲线界面下，按“ENTER”键即可进入浓度测试界面。
F．未知样浓度测定:将参比溶液拉(推)入光路，调0．000A/ 100．0%T，再将未知浓度的样品拉(推)入光路中，按“ENTER”键，显示器上便可显示相应样品的浓度。重复上述步骤，可以完成多个样品的浓度测试。
G．数据的打印或删除:系统最多可以存储200组测试数据，若按“ENTER”键即可进入打印选择界面。如果仪器连接了打印机，可以选择“打印数据”，然后按“ENTER”进行数据打印;如果系统未连接打印机且用户仅想消除数据，可直接选择“删除数据”后按“ENTER”键确认。按“取消”键退出。打印数据后，系统内的存储数据将被清除。
③打开曲线直接测定法:所有建立的曲线都会被自动存储在系统里并按顺序自动编号。下次使用时可以直接调出曲线进行测试，无需重复建立。当想调出曲线时，在标准曲线法主界面下，用上下键选定“打开曲线”，按“ENTER”键即可进入已建曲线选择界面。
系统共可存储50条标准曲线，进入曲线选择界面后，用上下键将光标移动到所需要的曲线上，按“ENTER”键确认，则系统会显示出曲线，再按“ENTER”键即可用选定的曲线对未知浓度样品进行测试。
④删除曲线:此功能用来删除已保存的曲线，若要删除某条曲线，在标准曲线法主界面下，用上下键选定“删除曲线”，按“ENTER”键进入删除曲线选择界面。用上下键选定所要删除的曲线方程，按“ENTER”进入删除再确认界面，选择“是”并按“ENTER”键后曲线方程即被删除，同时返回上级菜单。按“ESC”返回上级菜单。
(5)系统法(F模式)
系统法是工作曲线法的简单应用，如果用户已知曲线方程，可以直接将方程的系数K和B输入仪器，并利用该方程进行未知浓度样品的测试。
①进入系统法:在定量测量主界面下，按“MODE”键即可进入系数测量主界面。
②设定系数K:用上下键将光标移动到“曲线参数K”上，按“ENTER”键确认，系统即进入K设定界面。K值的设定方法同前面建立标准曲线中浓度的输入方法相同，在此不再详述。需要指出的是在输入K值前，首先要对K值的正负进行选择。
③设定系数B:用上下键将光标移动到“曲线参数B”上，按“ENTER”键确认，系统进入参数B设定界面。方法同K值设定。
④测试:B值设定并确认后，系统自动返回到上级界面。用上下键将光标移动到“测试”上，并按“ENTER”键确认，则系统进入到预测试界面，继续按“ENTER”键进入到数据记录界面，此时将参比溶液放入光路，按“ZERO”键调100%T，然后把待测样品接入光路，按“START”键进行测试，系统将测试结果自动存储。系统共可存储200组数据。如果波长未设定，需要在预试界面或测试界面进行波长设定。
4．如何校正0%T
UV-5100型分光光度计属于全自动型仪器，在测试过程中不需要每次测量都校正0%T，仪器中校正0%T对应的操作为“暗电流校正”。如果仪器的使用环境发生改变(如温度、工作电压、环境光线发生变化)，则需要进行暗电流校正操作，在“系统应用”中选择“暗电流校正”，确认即可。
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