实训34 抑菌圈法测试化学消毒剂杀菌抑菌作用
一、实训目的
（1）了解常用化学药品对微生物的作用。
（2）学习用抑菌圈法测定常用化学消毒剂的杀菌抑菌作用的大小。
二、实训原理
化学消毒灭菌是指用化学药品来杀死或抑制微生物的生长繁殖。应用于消毒灭菌的化学药品简称消毒剂。消毒剂的杀菌或抑菌作用的机理：①使微生物蛋白质凝固变性，或与蛋白质结合成盐类；②使微生物细胞成分氧化、水解；③干扰和破坏细菌酶的活性，影响细菌的新陈代谢；④改变或降低细菌的表面张力，增加细胞膜的通透性，使菌体内物质外渗，导致细胞破裂。常用的化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等。
本实训采用抑菌圈法测试某些常用化学消毒剂对微生物的杀菌和抑菌作用的大小，从而了解它们的杀菌或抑菌性能。同时，对市售的抑菌洗手液产品进行测试，对抑菌化学品的研制有一定的指导意义。
三、实训器材
1．设备
超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，电炉，恒温水浴锅，微波炉，生化培养箱。
2．仪器与用具
培养皿，吸管，镊子，滤纸，烧杯，玻璃棒，锥形瓶。
3．培养基与试剂
营养琼脂培养基，碘酒，升汞，苯酚，乙醇，来苏尔，新洁尔灭，龙胆紫，高锰酸钾，威露士抑菌洗手液，艾叶抗菌洗手液。
4．菌种
大肠杆菌。
四、实训步骤
1．实训准备
（1）配制10种常用化学消毒剂。
①2%碘酒：用市售碘酊直接分装50mL置于棕色试剂瓶中。
②0．1%升汞溶液：称取0．1g HgCl2溶解于100mL水中，置于棕色试剂瓶中。注意有毒，最好专人配制。
③5%石炭酸溶液：称取5g苯酚100mL，溶解于95mL水中，置于棕色试剂瓶中。注意苯酚腐蚀性强，戴手套操作。
④75%乙醇溶液：量取95%乙醇78．9mL加水稀释至100mL，置于试剂瓶中。
⑤3%来苏尔：量取市售50%来苏尔6mL加水稀释至100mL，置于试剂瓶中。
⑥0．25%新洁尔灭：量取市售5%新洁尔灭5mL加水稀释至100mL，置于试剂瓶中。
⑦0．05%龙胆紫溶液：称取0．05g龙胆紫溶解于100mL水中，置于棕色试剂瓶中。
⑧0．1%高锰酸钾溶液：称取0．1g高锰酸钾溶解于100mL水中，置于棕色试剂瓶中。
⑨威露士抑菌洗手液：用市售威露士抑菌洗手液直接分装50mL，置于试剂瓶中。
⑩艾叶抗菌洗手液：用市售艾叶抗菌洗手液直接分装50mL，置于试剂瓶中。
（2）准备φ90mm培养皿3个，并剪取直径为1cm的圆形滤纸片10片，置于另一个洁净干燥的培养皿中，包扎，准备2mL吸管1支，包扎，121℃高压灭菌20min。
（3）依照营养琼脂培养基试剂瓶上说明方法配制营养琼脂培养基100mL 1瓶。
（4）大肠杆菌菌悬液制备：制备100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基1瓶，121℃高压灭菌20min，冷却后接入大肠杆菌斜面菌种1支。摇匀，37℃培养1～2天，至浑浊为止。
2．操作步骤
（1）将10种化学消毒剂、无菌镊子、无菌培养皿、无菌吸管、吸耳球、无菌滤纸片等用具放入超净工作台中照紫外光20～30min。
（2）将营养琼脂培养基放入微波炉中熔化完全，并冷却至约45℃。
（3）在超净工作台内，用无菌吸管吸取大肠杆菌菌悬液2mL放入100mL约45℃营养琼脂培养基中，摇匀，然后将培养基注皿，待凝固，倒3个培养皿。
（4）将培养皿底部分区，编号（图3－33）。
（5）用无菌镊子分别夹取滤纸片浸入各种化学消毒剂中，取出，在瓶壁上除去多余药液后，以无菌操作将滤纸片对号放入培养皿的小区内，注意切勿滑动。
（6）将培养皿倒置于37℃培养箱中培养24h、48h、72h取出。测定抑菌圈大小。
图3－33 培养皿底部分区示意图
五、结果记录
记录各种常用化学消毒剂的抑菌圈直径（mm），填入表3－24，绘制折线图或方柱图比较各种常用化学消毒剂对大肠杆菌杀菌抑菌能力的大小，并附抑菌圈彩照或图示。
表3－24 各种常用化学消毒剂的抑制圈大小
由此可知，各种常用化学消毒剂对大肠杆菌杀菌抑菌能力的大小顺序为：________。
六、思考题
（1）试分别说明重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机化合物以及碘、表面活性剂等常用化学消毒剂杀菌抑菌作用的机理。
（2）化学消毒剂对微生物所形成的抑菌圈未长菌部分是否说明微生物细胞已被杀死？为什么？
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