流式细胞术检测

    第三节　流式细胞术检测

    流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种先进的方法，基本原理是用激光检测鞘液流中染色细胞标志物的荧光强度和宽度、前向散射光强度和宽度、侧向散射光强度和宽度等参数，以分析细胞成分的技术。由于荧光标记的单克隆抗体不同，即可定量测出细胞上的不同抗原物质来区分细胞，因此，FCM是细胞生物学、分子生物学、分子免疫学、单克隆抗体技术、激光技术和电子计算机技术等学科高度发展和综合的结晶。基本流程为：将待测标本制备成单细胞悬液，通过荧光染色后进入充满鞘液的流动室，鞘液压力与样品流压力是不同的，当二者的压力差异达到一定程度时，鞘液裹挟着样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。将细胞中要检测的部分特异性地标上荧光染料，那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光发出特定波长的荧光，通过一定波长选择通透性的滤色片，可将不同波长的散射光、荧光信号区分开来，并送到不同的光电倍增管中，经过一系列的信号转换、放大和数字化处理，就可以在计算机屏幕上直观地统计出染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。选择不同的单克隆抗体及荧光染料，还可以利用FCM同时测定一个细胞上的多种不同特征；如果对具有某种特征的细胞有兴趣，还可以利用FCM的分选功能将其分选出来，以便进一步培养和研究，还可用于以下检测：