实验二 胃液分泌的调节
一、实验目的
1.学习通过实验测定胃液分泌的方法。
2.观察胃泌酸现象及其分泌的调节。
二、实验原理
由外分泌细胞构成的外分泌腺主要有3种，分别是贲门腺、泌酸腺和幽门腺，其中泌酸腺由壁细胞、主细胞和黏液颈细胞组成，壁细胞分泌盐酸和内因子，主细胞分泌胃蛋白酶原，黏液颈细胞则分泌黏液。胃液主要成分包含水、盐酸、HCO3-、Na+、K+等无机物和消化酶等。神经与体液因素都参与了胃酸的分泌调节。胃泌素、组胺、拟胆碱药物和迷走神经的兴奋都可以促进胃液分泌，阿托品通过阻断迷走神经而抑制胃液分泌。
三、实验对象
大白鼠。
四、实验器材
组织剪、止血钳、手术刀、眼科镊、圆头镊子、持针钳、粗剪刀、100mL锥形瓶、1mL注射器、10mL注射器、直径2～4mm的细塑料管若干、刺激器、纱布、滴定管、支架、pH试纸、棉线、温度计等。
五、实验药品
乙醚、1%戊巴比妥钠、生理盐水、0.01mol/L的NaOH、1%酚酞、0.5mg/mL的阿托品、0.01%磷酸组织胺、五肽胃泌素、氨甲酰胆碱、西咪替丁注射液。
六、实验步骤和观察项目
1.麻醉
取体重250g左右的健康大白鼠，雌雄不限，实验前预先禁食18～24h，自由饮水。腹腔注射1%戊巴比妥钠溶液麻醉动物，用药剂量按30～50mg/kg体重。麻醉时，注意控制药量注射速度，如果大白鼠呼吸变得浅而快，则表明注药速度太快，应适当放缓注射速度。
2.固定
麻醉成功后，将动物仰卧置于手术台上并用手术线固定其四肢。
3.颈部手术
用粗剪刀剪去颈部被毛，用止血钳提起颈部两侧皮肤，用组织剪在颈部正中做切口，切口长约2cm。钝性分离颈部组织，暴露气管，吸净气管内分泌物，气管插管。
4.食管插管
剪开食管，将食管插管插入到胃内，然后以插管为中轴结扎固定，防止其滑脱。
5.腹部手术
剪去动物腹部的毛发，切开腹部的皮肤与肌肉，打开腹腔。
6.胃幽门插管
小心拉出十二指肠，动作要轻柔，注意不要损伤支配十二指肠和胃的神经与血管。在胃与十二指肠处穿过两条手术线，两线相距1cm，先结扎十二指肠的远端，靠幽门侧的线打松结。在两线之间剪开十二指肠，将幽门插管经十二指肠和胃幽门插入胃内，立刻结扎固定。
7.胃液样品的收集和胃酸的测定
用注射器吸取38℃生理盐水冲洗胃30min，使胃内残留食物流出体外，当流出的盐水澄清时表示胃被洗净。此时将胃送回腹腔，用温热生理盐水浸过的纱布覆盖，以防止腹腔水分蒸发和体温的下降。在温度计表面涂石蜡油，插入大白鼠肛门内，随时观察大白鼠体温。
8.实验观察
（1）基础状态下胃酸的分泌 用5mL的生理盐水冲洗胃，连续冲洗3次，每次2min，用锥形瓶收集自幽门端流出的液体。收集液用0.01mol/L的NaOH溶液滴定，酚酞为指示剂，然后通过消耗NaOH量计算2min胃酸的分泌量。
（2）刺激神经对胃液分泌的调节 电刺激迷走神经多次，每次5s，时间间隔为20s，30min后收集胃洗出液，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（3）切断迷走神经对胃液分泌的调节 切断迷走神经，30min后收集胃洗出液，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（4）磷酸组织胺对胃液分泌的调节 皮下注射0.01%磷酸组织胺，注药剂量为1mg/kg，30min后收集胃洗出液，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（5）西咪替丁对组胺泌酸作用的调节 肌肉注射西咪替丁，用药剂量为250mg/kg，收集3个样品，然后再向皮下注射0.01%磷酸组织胺，注药剂量为1mg/kg，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（6）五肽胃泌素对胃液分泌的调节 皮下注射五肽胃泌素，注药剂量为100μg/kg，30min后收集胃洗出液，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（7）氨甲酰胆碱对胃液分泌的影响调节 肌肉注射氨甲酰胆碱，用药剂量为10μg/kg，30min后收集胃洗出液，连续收集3个样品，用滴定法测定胃酸分泌量。
（8）阿托品对氨甲酰胆碱泌酸的调节作用 皮下注射阿托品，用药剂量为1mg/kg，收集3个样品后，然后向肌肉注射氨甲酰胆碱，用药剂量为10μg/kg体重，连续收集3个样品胃洗出液，用滴定法测定胃酸分泌量。
七、注意事项
1.大白鼠不宜麻醉过深，以避免影响胃液分泌量。
2.大白鼠迷走神经比较细，分离和电刺激都要小心。
八、思考题
1.哪些因素对胃酸分泌作用影响比较大？
2.实验中用到的药物影响胃酸分泌的机制是什么？
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