巴氏染色法

    

    巴氏染色法（papanicolaou stain）是双重多色染色法，其特点是细胞透明度好、细胞结构清晰、涂片色彩丰富而鲜艳，可以观察女性激素水平;其缺点是操作比较复杂，试剂费用高，染色质量不及苏木素、伊红法稳定。

    （一）染色方法

    1.将已固定的涂片依次置入80%、70%、50%乙醇中各半分钟，最后置于水中2～3min。

    2.入苏木素液中染5～10min，取出水洗。

    3.浸入0.25%的稀盐酸中数秒钟，以洗去细胞内多余的苏木素染液。待涂片转为淡红色或橘红色时即取出。

    4.在流水中蓝化10～15min，使涂片又转为蓝色，或在稀氨水（100ml蒸馏水中加浓氨水1滴）或稀碳酸锂（100ml蒸馏水中加饱和碳酸锂1滴）中蓝化，即“返蓝”。

    5.如在稀氨水或稀碳酸锂中蓝化时，取出后须流水洗5min。

    6.依次在50%、70%、80%乙醇中脱水，最后在95%乙醇中脱水2min。

    7.在橘黄G6染液中染1～2min。

    8.在95%乙醇中浸洗2次，以洗去多余橘黄。

    9.入EA36染液中染2～4min，至胞质着色鲜明为止。

    10.在95%乙醇中浸洗2次，以洗去多余染剂，再入无水乙醇中脱水。

    11.浸入二甲苯中透明。

    12.用树胶封片。

    附:简化巴氏法

    1.将固定的涂片用1/15mol/L磷酸缓冲液（pH6）滴洗1次，30s后浸入蒸馏水1min。

    2.入苏木素染液中染3～4min。

    3.入自来水中水洗蓝化，镜下观察细胞核呈蓝紫色为宜。

    4.浸入80%、95%乙醇中脱水各2min。

    5.在EA36染液中浸染2～3min。

    6.入95%乙醇浸洗2～3次，去掉多余染色，置无水乙醇中2次脱水。

    7.入二甲苯中透明2次。

    8.树胶封片。

    （二）染色结果

    上皮细胞呈深蓝色或深紫色，核仁红色，胞质粉红色或蓝绿色;红细胞鲜红色;白细胞核深蓝黑色。

    （三）染液配制

    1.苏木素染液配制 同苏木素伊红染色法所用苏木素染液配制。

    2.橘黄G6染液 一般用95%乙醇配制成0.5%溶液。此染液可用于观察受女性激素影响的细胞学变化。乳腺细胞学涂片染色过程中可省略此液染色。

    3.EA36染液 是3种染料配制而成的，即光绿、俾斯麦棕和黄色伊红。先将各种染料配成溶液，分装于玻璃瓶中，用时混合，每次不必配得太多，因为久置染色效果欠佳。

    （1）光绿液:光绿0.5g溶于5ml蒸馏水中，再加无水乙醇至100ml（或光绿0.5g加95%乙醇100ml，于水浴加温至溶解）。

    （2）俾斯麦棕液:俾斯麦棕0.5g溶于5ml蒸馏水中，加无水乙醇至100ml（或俾斯麦棕0.5g加95%乙醇100ml于水浴中加温至溶解）。

    （3）黄色伊红液:黄色伊红0.5g溶于5ml蒸馏水中，加无水乙醇至100ml。

    配制方法:光绿液45ml;俾斯麦棕液10ml;黄色伊红液45ml。

    上述溶液混合后加磷钨酸0.2g，碳酸锂饱和液1～2滴，注意光绿中若出现沉淀，应置温水浴中使其溶解仍可应用。EA36均为乙醇配制而成，故需随时将瓶子盖好。